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制备感受态细胞的具体步骤

时间:2024-11-05 20:40:48

最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于制备感受态细胞的具体步骤的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。

方法/步骤

1、首先,用枪头挑取单菌落,投入盛有10mlLB液体培养基的50ml试管中,在37摄氏度220r/min中培养14-16小时。

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2、然后,用1%的种量接种于1000mlLB液体培养基中,在37摄氏度220r/m坡纠课柩in下,振摇2-3小时,当OD600值达到0.3-0.4时,停止培养。

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3、然后,将菌液在冰上预冷半小时,随后将菌液分装到500ml预冷的离心杯中,在4摄氏度2500r/min下离心十分钟。

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4、然后,弃上清液,离心杯中加入少量ddH2O,使沉淀悬浮后,再将水注满离心杯,在4摄氏度4000r/min下离心十分钟。

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5、然后,弃上清液,加少量灭菌水,重悬菌体,再将水注满离心杯,在4摄氏度4000r/min,离心十分钟。

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6、然后,弃上清液,往离心杯中加入少量10%甘油,重悬菌体,再加满10%甘油,于4摄氏度4000r/min,离心十分钟。

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7、最后,弃上清液,每个离心杯中加入5葡矩酉缸ml的10%甘油,使沉淀悬浮后,将菌液以100微升/管分装与1.5ml的离心管中,在-80摄氏度冰箱中保存。

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