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不同浓度的氨基酸结构类似物对菌株生长抑制作用

时间:2024-10-17 10:27:03

最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于不同浓度的氨基酸结构类似物对菌株生长抑制作用的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。

不同浓度的氨基酸结构类似物对菌株生长抑制作用

方法/步骤

1、首先,氨其酸结构类似物对出发菌株生长的抑制及其恢复作用,生长抑制及其恢复作用的初步确定,挑取出发菌株Asl.542在斜面上培养24h细胞,一环接人3ml无菌生理盐水中,离心洗涨2次,制成菌悬液。再以无菌移液管吸取菌悬液0.1ml均匀地择在基本培养基平皿上。

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2、然后,取少许固体的AEC加在平皿不同区域的中心。因为苏氨酸对AEC的抑菌可以起增效作用,所以在AFC处同时再加上少量的苏教酸,30C培养24h后在加上述药物的位点周围有明显的抑菌圈出现,说明AEC对菌株AS1.542的生长有明显的抑制作用。在AEC的抑菌圈内分别加上少量固体的L-赖氨酸,再继续培养24~28h.发现在加有氨基酸位点周围重新出现明显的生长现象,说明它对AEC对菌的生长抑制有恢复作用。

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3、然后,不同浓度的氨基酸结构类似物对出发菌株生长的抑制作用,采用液体培养法进一步碍测行臬试验测定不同浓度的AEC对出发菌株Asl.542生长的抑制及其恢复作用。在含2ml液体断芡闽彝基本培养基的试管中,分别加入AEC'Thr为0.25/0.20.5/0.1.0/1.0.2.0,2.0及3.0/3.0mg/ml,同时以不加结构类似物的试管培养物作为对照,各管接种洗净Asl.542菌悬液0.1ml作为A组试验。

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4、然后,B组试验除培养液中加人上述不同浓度的AEC'Thr外,还在含有AEC的各管内分别添加1mg/ml的L-赖氨酸,同样接菌悬液0.1ml,A.B两组同时置30C摇床上培养20h后,用721型分光光度计(波长620nm)测定各管菌悬液的吸光度,计算出各试管中菌体的相对生长率,以确定AEC对出发菌株AS1.542生长抑制的浓度及L-赖氨酸对生长抑制的恢复作用。

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5、然后,进行诱变处理,钝齿棒杆菌Asl.542对L-赖氨酸的结构类似物AEC的抑制生长有显著的敏感性,而这种抑制作用可被L-赖氨酸恢复,可以确定AS1.542菌体为出发菌株,经人工诱变筛选产L.-赖氨酸的抗反馈调节突变株,选育这类突变株的诱变处理方法与筛选营养缺陷型相同。

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6、最后,抗AEC突变株的检出,把经N哌囿亡噱TG处理过的AS1.542菌悬液离心除去上清液,用生理盐水把菌体离心洗涤3次后,将洗净的菌体悬浮在3ml生理盐水中,混勻以101.吭稿荔徊10~及10-33个不同稀释度进行稀释,制备成包括原菌悬液在内的4个含细胞数目不同的菌悬液。然后用无菌移液管从4个不同样品中各取0.1ml分别均匀涂布在含AEC/Thr为1,2/2和3/3mg/ml的基本培养平皿上,并涂布接种在不含结构类似物的同样平板上作为对照,培养5~7d.若在含不同剂量AEC/Thr的平皿上生长。

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