最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于稀释噬菌体的方法的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
1、首先,取含有0饱终柯肢.9ml液体培养基的4支试管分别注明10-10-*.10-5.10。用1ml无菌吸管吸0.1ml102E.coli噬菌体人10一的试管中,摇匀。另取一支1ml无菌屑枯扔羟吸管从10一试管内吸0.1ml人10‘试管中,摇匀。往后依次类推,稀释至10-试管。
2、然后,噬菌体液与菌液混合,取5支无菌空试管分别标明10-‘.10-5.10瀵鸦铙邮10-7和对照。用无菌吸管从吭稿荔徊10-3噬菌体稀释管吸0.1ml人10一的空试管内,用另支吸管从10一‘稀释管内吸0.1ml人10-5空试管内,后依次类推直至10-空试管。
3、然后,将E.coli菌液摇勻,用无菌吸管吸取0.9ml人对照试管内,再吸0.9ml人10“试管内,摇匀,依次从最后一管加起,直至10一‘试管,各管均加0.9mlE.coli液,且分别摇匀。
4、然后,在上层培养基内加入混合液,取5管上层培养基并标明10‘.10-5.10-10-7和对照,熔化后冷却到50C置水浴锅中保温。分别将4管混合液和对照对号加入上层培养基试管内,并立即摇匀,在底层平板上倒人已接种的上层培养基。
5、然后,将接种摇勻的上层培养基迅速对号倒人底层平板上,放平摇匀,使其铺满平板,凝固后于37C培养。
6、最后,进行观察,将每一稀释度的噬菌斑形成单位(pfu)记录于实验报告表格内,并选取30~300个pfu数的平板计算每毫升稀释的原液的噬菌体效价。