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悬浮细胞的siRNA转染操作步骤

时间:2024-10-23 12:29:38

悬浮细胞的siRNA转染操作步骤,以24孔板siRNA转染为例

方法/步骤

1、1.提前1天细胞种植采用对数生长期的悬浮细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。

方法/步骤2

1、2.转裔瞍爿嘞染过程⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

2、⑵取1ul的EntransterTM-R40廴类锾渭00,然后加入24ul无血清稀释液体,充分混匀,制成EntransterTM-R4000稀释液,终体积为25μl。室温静置5分钟。

3、⑶将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合,室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

4、⑷将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基(可含10%血清和抗生素)的细胞上,前后移动培养皿,混合均匀。

5、⑸转染后6小时观察细胞状态,如状态良好可不必更换培养基,继续培养24-96小时得到结果。

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