相信很多同学在实验中都会接触到elisa的学习,对于新人来说,elisa的操作,其实非常的简单,今天给大家讲解如何用酶联免疫分析试剂盒做eliasa
工具/原料
酶标仪
37°C恒温箱
高精度加样器及枪头
样本
方法/步骤
1、标准品加样设置标准孔和样孔,各加不同浓度标准品,分别设空白孔,待测样品孔。在酶标腻戴怯猡包被版上待测样品孔中先加样品稀释液,再加待测样品。加样时尽量不触及孔壁
2、加酶温育和配液每个孔加入酶标试剂,空白孔除外,用封板膜封板后置于37°C温育60分钟,而后配液,将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
3、洗涤小心揭掉封板膜,丢弃掉液体,甩干,每个孔中加满洗涤液,静置30秒后丢弃掉,如此重复5次,每次清洗后都要拍干
4、显色每个孔先加入显色剂A,而后加入显色剂B,轻轻的震荡混匀,37°C避光显色15分钟(可放在37°C恒温箱中进行避光处理)
5、终止每个孔加终止夜,终止反应,此时可以看到液体的颜色由蓝色立马转为黄色,且黄色较淡,如图中所显示的颜色所示
6、测定在加终止夜的15分钟以内,以空白孔凋零,450nm波长依序测量各孔的吸光度OD值,以钿泼兽匿标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘制标准曲线,就可进行计算了