最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于外源基因蛋白的诱导表达及蛋白质分离的方法的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
1、首先，分别挑取经PCR鉴定为阳性的克隆和对照中的菌落，分别接种于含有卡那霉素(终浓度50pg'mI)的液体LB培养基中，在37C、250r/min条件下培养过夜。
2、然后，按1:50~1:100的比例分别吸取上述培养液于含有卡那霉素(终浓度5廴类锾渭0ug/mL)的1扉钛笆哇00mL，液体LB培养基中，在37C、250rmin条件下培养3~4h，使其OD，值达到0.6~0.8。
3、然后，加人IPTG(终浓度为0.5mmol/L)，在37C、250r/min条件下培养，进行外源基因的诱导表达，期间按不同的时间分别收集菌体，探索蛋白质最佳表达时间。
4、然后，在4C.4000r/min条件下离心20min，收集菌体，弃上清，加入5mL的10mmolL的Tris.Cl(pH8.8)于沉淀内，反复冻融几次，再离心，弃上清。
5、然后，在沉淀中加人2mL的10mmol/L的Tris.CI缓冲液(pH8.)，再加2mL196的TritonX-100，加溶菌酶至终浓度为100pg/mL，于30~C保温30min。
6、最后，用超声波处理上述溶液后，在1闸拊福律2000r/min条件下离心5min，分别取上清和沉淀各15yL(沉窜艿但郄淀要稀释)，分别加人15PL2XSDS-PAGE上样缓冲液，混匀。每个样品在沸水中煮沸10~15min，同时将蛋白Marker在95C热处理5min。
