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大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

时间:2024-10-23 08:38:11

研究神经系统疾病,多需要体外培养神经干细胞。因此学会大鼠体外神经干细胞的培养方法十分重要。

工具/原料

手术器械一套超净工作台咯悝滩镞CO2培养箱培养皿、离心管、加样枪、巴氏吸管神经组织细胞分离剂、神经干细胞培养基低速离心机(1000-5000转/分)光学解剖显微镜、倒置相差显微镜

新生大鼠

方法/步骤

1、咯悝滩镞实验前准备的试验器具和试剂:高压灭菌细胞培养要用到的器皿:玻璃试管、离心管、玻璃吸管、瓶子、枪头等和各种手术器械。新鲜配置75%酒精。实验前半小时将高压灭菌鹚兢尖睁的所有器械盒放入超净工作台内,紫外线照射至少半小时。如所示,准备这些器具准备在超净工作台上进行紫外消毒。

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

2、分离海马组织,步骤如下:

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

3、制备神经细胞悬液,剪碎海马为1mm3大小的组织娄壶狩匈块,用0.25%胰酶(或Accutase)37℃消化2min,终止反应1000r/min离心3min,弃去胰酶。加入种植液(ne锇栀劐箨uralbasal+2%B27+0.5%L-glutamine),吹打形成细胞悬液。将细胞悬液加入培养皿中(3ml/皿/30mm)。

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

4、观察体外培养的神经干细胞的生长发育情况,第一天培养显微镜拍照如下:

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

5、培养24小时后再在显微镜下观察,如下图所示:

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

6、培养第四天后,在显微镜下观察,如图所示:

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

7、培养第7天的,在显微镜下观察,如下图所示:

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

8、总结一下,从培养当天开始到培养第7天,细胞形态的模式图如下所示:

大鼠神经干细胞的培养方法的具体步骤

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