实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。咯悝滩镞实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。
工具/原料
1.4%agarosegel：2gagrose50ml水，高压灭菌
2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（坡纠课柩invitrogen）0.07gNaHCO3H2O，调PH6.1，定容至100ml，无菌过滤
supplementedGrace：1牯拚珈嗄×Grace添加3.33mg/mlLactalbumin，3.33mg/mlyeastolate，无菌过滤
4.高温灭活FBS
主要设备1.6孔板2.12ml离心管3.100ml无菌玻璃瓶4.无菌吸管5.70℃水浴锅
实验材料杆状病毒，SF9：5×105cells/ml
方法/步骤
1、无菌条件下，2ml/孔细胞（5×105cells/ml）种入6孔板，室温孵育1h使其贴壁，孵育后镜检其贴壁程度；
2、将4%agarosegel放入70℃水浴锅融解，空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热；
3、将杆状病毒用无血清supplementedGrace梯度稀释：10-1~10-8。
4、弃6孔板内上清，快速加入稀释好的病毒，1ml/孔，复孔，室温孵育1h。
5、配置上层琼脂：加20ml高温灭活FBS到2×Grace100ml，25ml2×Grace钱砀渝测（含FBS）12.5罪焐芡拂ml无菌水12.5ml4%agarosegel，至预热的100ml无菌瓶，轻轻混匀，放入37℃水浴锅备用；
6、弃6孔板内上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；
7、将6孔板放入27℃培养箱，培养4－10天；
8、计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌斑。