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CTAB法小量提取植物基因组的DNA方法

时间:2024-09-20 21:28:55

最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于CTAB法小量提取植物基因组的DNA方法的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。

CTAB法小量提取植物基因组的DNA方法

方法/步骤

1、首先,将海绵垫固定在制胶架上,把类似“三明治“结构的制股板系统重直放在海绵h方,用分布在制胶架两侧的偏心轮固定好制胶板系统,一定是短玻璃的一面正对看自己。

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2、然后,将共有三根聚乙烯细管,其中两根较长的为15.5cm,短的那根长9cm,将凹淫鹉伍短的那根与Y形管相连,两根长的则与小套管相连,并连在30mL的注射器上。在两个涛类唯鳙注射器上分别标记“高浓度”与“低浓度”,并安装上相关的配件,调整梯度传送系统的刻度到适当的位置。

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3、然后,通过逆时针方向旋转凸轮到起始位置,为设置理想的传送体积,旋松体积调整旋钮。将体积设置显示装置固定在注射器上并调整到目标体积设置,旋紧体积调整旋钮。例如16cmX16cm聚内烯酰胺胶(1mm厚度),设体积调整装置到14.5。

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4、然后,配制两种变性浓度的丙烯酰胺溶液到两个离心管中,每管加人18uLTEMED.80pL10%过硫酸铵深液,迅速盖上并旋紧帽后上下颠倒数次混匀。用连有聚乙烯管标有“高浓度”的注射器吸取所有高浓度的胶,对于低浓度的胶,操作同上。

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5、然后,通过推动注射器推动杆小心赶走气泡并轻柔地晃动注射器,推动溶液到聚丙烯管的末端。注意:不要将凝胶液推出管外,因为这样会造成溶液的损失,导致最后凝胶体积不够。

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6、然后,分别将高浓度、低浓度注射器放在梯度传送系统的正确一侧固定好,注意:这里一邈赕瑟遂定要把位置放正确,再将注射器的聚丙烯管同Y形管相连。轻柔并稳定地旋转凸掭跞绅昭轮来传送溶液。在这个步骤中最关键的是要保持恒定匀速且缓慢地推动凸轮,以使溶液恒速地被灌人到三明治式的凝胶板中。

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7、最后,小心的插人梳子,让凝胶聚合大约1h,并把电泳控制装置打开,预热电泳缓冲液至60C。迅速清洗用完的设备,聚合完毕后拔走梳子,将胶放人到电泳槽内,清洗点样孔,盖上温度控制装置,使温度上升至60C。

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